CCK-8試劑盒并不是傳統(tǒng)意義上的“設(shè)備”，而是一種用于檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測(cè)試劑盒。它的核心成分是WST-8，在電子耦合劑存在下，可被活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原生成水溶性橙黃色甲臜產(chǎn)物。甲臜生成量與活細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，即可間接反映細(xì)胞活力、增殖水平或藥物毒性。
與傳統(tǒng)的MTT法相比，CCK-8試劑不需要使用有機(jī)溶劑溶解產(chǎn)物，生成的甲臜可直接溶于培養(yǎng)基，操作更簡(jiǎn)便，對(duì)細(xì)胞毒性也較低。它常用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)、腫瘤藥敏試驗(yàn)、生物因子活性檢測(cè)以及化妝品原料安全性評(píng)估等科研場(chǎng)景。
1.主要應(yīng)用領(lǐng)域
可用于抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)、細(xì)胞因子誘導(dǎo)增殖實(shí)驗(yàn)、干細(xì)胞增殖活性評(píng)估、化妝品原料細(xì)胞毒性檢測(cè)以及環(huán)境污染物對(duì)細(xì)胞的影響研究。
2.檢測(cè)原理
WST-8在電子耦合劑作用下被活細(xì)胞脫氫酶還原，生成橙黃色水溶性甲臜。顏色越深，通常表示活細(xì)胞數(shù)量越多；若細(xì)胞受到毒性影響，顏色則變淺。該反應(yīng)可通過(guò)酶標(biāo)儀在450 nm處讀取吸光度進(jìn)行定量。
3.使用方法
將細(xì)胞接種至96孔板，貼壁細(xì)胞一般每孔1,000—10,000個(gè)，白細(xì)胞建議不低于2,500個(gè)/孔。預(yù)培養(yǎng)后加入待測(cè)物質(zhì)，再按培養(yǎng)基體積的10%加入CCK-8溶液，37℃避光孵育1—4小時(shí)，最后用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm吸光度。建議設(shè)置空白孔、對(duì)照孔和實(shí)驗(yàn)孔，并采用復(fù)孔取平均值。
4.注意事項(xiàng)
加樣時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)影響OD值讀??；96孔板邊緣孔易蒸發(fā)，可改加PBS或培養(yǎng)基而不用于測(cè)定。若待測(cè)物質(zhì)具有氧化性或還原性，可能干擾顯色，應(yīng)設(shè)置藥物空白對(duì)照或在加試劑前更換新鮮培養(yǎng)基。試劑應(yīng)避光保存，4℃可保存約12個(gè)月，-20℃可保存約24個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
總體來(lái)看，CCK-8試劑盒是一種操作簡(jiǎn)便、靈敏度較好、適合高通量檢測(cè)的細(xì)胞活力檢測(cè)工具。它的結(jié)果受細(xì)胞接種密度、孵育時(shí)間、藥物性質(zhì)、試劑保存狀態(tài)和酶標(biāo)儀讀數(shù)條件影響較大。正式實(shí)驗(yàn)前建議先摸索細(xì)胞數(shù)量和顯色時(shí)間，并合理設(shè)置對(duì)照，以保證數(shù)據(jù)具有參考價(jià)值。
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