執(zhí)照.jpg)
牛外周血白細胞分離液說明書
（細胞培養(yǎng)及分子生物學）
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
|
|
| 名稱 | 產(chǎn)品編號 |
| 規(guī)格 |
| ||
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
| A | 牛外周血白細胞分離液 |
|
|
| 200ml |
| ||
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
| B | 樣本稀釋液（贈品） | 2010C1119 |
| 200ml |
| |||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| C | 清洗液（贈品） |
|
| 2010X1118 |
| 200ml |
| |
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
| D | 紅細胞裂解液（贈品） | NH4CL2009 |
| 100ml |
| |||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| E | 說明書 |
|
|
|
|
| 1 份 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
【實驗前準備】 |
|
|
|
|
|
|
| ||
A． 適用儀器 |
|
|
|
|
|
|
| ||
| zui大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機 |
|
|
|
|
| |||
B． 耗材 |
|
|
|
|
|
|
|
| |
|
|
|
|
|
|
|
| ||
| 產(chǎn)品名稱 |
| 產(chǎn)品貨號 |
| 產(chǎn)地 |
|
| ||
|
|
|
|
|
|
|
| ||
| 15ml 離心管散裝 |
| 339650 |
| 美國 NUNC |
|
| ||
|
|
|
|
|
|
|
| ||
| 15ml 離心管架裝 |
| 339651 |
| 美國 NUNC |
|
| ||
|
|
|
|
|
|
|
| ||
| 50ml 離心管散裝 |
| 339652 |
| 美國 NUNC |
|
| ||
|
|
|
|
|
|
|
| ||
| 50ml 離心管架裝 |
| 339653 |
| 美國 NUNC |
|
| ||
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
| 無菌膠頭滴管或塑料滴管 |
|
|
|
|
|
|
| |
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
【檢驗方法】 |
|
|
|
|
|
|
| ||
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：
情況 A：血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：
變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸
索，以達到zui理想分離效果。）
作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。
情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：
【注意事項】
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。
| 紅細胞 |
| 白細胞 |
| 血小板 |
|
|
|
|
|
|
|
| （4.0-10.0）×109 |
| ||
含量（個/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | （1.0-3.0）×1011 |
|
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% |
|
|
|
|
|
|
|
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
D.PCR 技術(shù)
注：上述技術(shù)方案詳情請登陸本公司搜索“細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說明書項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
|
|
|
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 | 適當增減轉(zhuǎn)速 |
|
| |
離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 | |
| ||
|
|
|
離心后白環(huán)層彌散 | 細胞密度過大 | 調(diào)整細胞密度 |
|
| |
離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細胞密度過小 | |
| ||
|
|
|
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到zui理想分離效果，
離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
